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【熱點(diǎn)應(yīng)用】使用NanoSight Pro掌握細(xì)胞外囊泡熒光標(biāo)記和分析白皮書

更新時間:2024-09-24       點(diǎn)擊次數(shù):258

在本文及其所涉及的完整版白皮書中,介紹了NanoSigh Pro開發(fā)的細(xì)胞外囊泡(EVs)的熒光標(biāo)記和檢測方法,以及指導(dǎo)這些方法實(shí)施的代表性數(shù)據(jù)。

 

通過光散射和熒光分析評估細(xì)胞外囊泡大小分布和濃度。采用多種熒光染料和熒光基團(tuán),不僅正式了EVs的存在,而且還有效地檢測了其表面和內(nèi)部RNA貨物上的四次跨膜蛋白生物標(biāo)志物。

 

文末免費(fèi)下載完整版白皮書。

 

細(xì)胞外囊泡(EVs)因其不斷發(fā)展的應(yīng)用和突破而引起了人們越來越大的探索興趣,特別是在疾病診斷和治療潛力領(lǐng)域。這些由活生物體內(nèi)的細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)最初被認(rèn)為是細(xì)胞廢物。然而,研究揭示了它們在細(xì)胞通訊中的關(guān)鍵作用。例如EVs的組成,可以反映其來源細(xì)胞的生理或病理狀態(tài),使之成為一些列疾病的生物標(biāo)志物,從癌癥到神經(jīng)退行性疾病和炎癥性疾病。

 

準(zhǔn)確表征EVs制劑的大小、異質(zhì)性和濃度可分析、了解生物功能和診斷提供重要信息。但從體液中提取的細(xì)胞外囊泡伴隨著非EVs成分,形成了相當(dāng)多樣化的異質(zhì)的系統(tǒng),這對分析表征提出了重大挑戰(zhàn)。

 

由于EVs的復(fù)雜性,通常采用多種技術(shù)方法來全面表征EVs,包括流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)、基于顯微鏡的方法和納米顆粒跟蹤分析(NTA)。

 

NTA已成為快速表征細(xì)胞外囊泡高分辨率大小和濃度的常用技術(shù)。

 

圖片

NTA光學(xué)裝置示意圖

 

在本文涉及的研究報告中,使用來自尿液的EVs,通過光散射和熒光分析評估其大小分布和濃度。采用多種熒光染料和熒光基團(tuán),通過直接標(biāo)記抗體進(jìn)行生物標(biāo)志物檢測,使用NanoSight Pro對樣品進(jìn)行納米顆粒跟蹤分析,對每次熒光測量應(yīng)用適當(dāng)?shù)募す獠ㄩL和熒光長通濾光片,在NS Xplorer軟件的專屬熒光模式下,可在單次測量中對光散射和熒光進(jìn)行組合分析,不僅報告尺寸分布,還直接報告濃度和熒光效率。

 

本白皮書闡述了如何使用NanoSight Pro探索各種標(biāo)記方法,遵循染料特性(例如光穩(wěn)定性和亮度)、樣品制備方法(例如抗體親和力和特異性、孵育條件)和測量條件(例如樣品呈現(xiàn)、儀器設(shè)置、測量時間)等一些簡單的規(guī)則,來實(shí)現(xiàn)熒光NTA檢測EVs亞群,從而揭示細(xì)胞外囊泡EVs的不同特性。

 

 

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